SHP-77人小细胞肺癌细胞介绍

　　SHP-77保留了SCLC的重要特征，具有稳定的生物化学特性，可以连续培养。该细胞系是小细胞肺癌中一种不常见的未分化大细胞突变体。它虽然具有突变体的形态，但保持了经典SCLC的生化特性。电子显微镜观察发现存在腺体形成和胞浆内板层体(intracytoplasmic lamellar bodies)。这些细胞表达神经内分泌标记物L-多巴脱羧酶和致密核心分泌颗粒(dense core secretory granules)。

　　SHP-77可用做检测51Cr和111In释放对体外细胞及裸鼠体内毒性的靶标，用于评估肺癌患者的细胞和血清的免疫反应水平。该细胞可用于评估接受放射或化学疗法治疗的SCLC患者的免疫状况。经本库STR检测无误。

　　STR鉴定结果为：Amelogenin:X,X；CSF1PO:10,11；D13S317:8,8；D16S539:11,11；D5S818:12,12；D7S820:11,11；TH01:7,7；TPOX:9,11；vWA:16,16。

　　细胞特性

　　1）来源：54岁男性肺;小细胞肺癌

　　2）形态：悬浮和松散贴壁

　　3）含量：>1x106细胞数

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　5）用途：仅供科研使用。

　　运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的。

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备RPMI-1640培养基87%

　　优质胎牛血清10%

　　GlutaMAX-1谷氨酰胺1%

　　Sodium Pyruvate丙酮酸钠1%

　　P/S青霉素-链霉素1%

　　注意:该细胞参考传代周期：4-6天,参考换液频率：每2-3天换1次液,传代时可以轻轻拍打细胞培养瓶侧面十余次，将悬浮的细胞进行收集离心，以40万~50万/mL的密度重悬传代。轻轻拍打后显微镜下观察仍贴壁未悬浮的细胞量多的话可以继续拍打重复收集，细胞量很少的则丢弃，不收集传代。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

　　该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

　　1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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