一、细胞基本属性

　　细胞名称NIH:OVCAR-8人卵巢癌腺癌细胞（STR鉴定正确）

　　种属来源人

　　年龄性别卵巢

　　生长特性贴壁生长

　　细胞形态上皮样细胞

　　细胞代数10代以内

　　生物安全等级1

　　细胞规格1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

　　支原体检测无

　　保藏机构ATCC

　　培养基1640+10%FBS

　　培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

　　冻存条件无血清冻存液，液氮储存

　　运输方式复苏发货（T25瓶免运输费用）/冻存发货（需加干冰运输费用）

　　供应限制仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

　　特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主

　　二、细胞培养操作

　　收货方式T25瓶冻存管

　　收货处理观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

　　传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养第二天换液并检查细胞密度

　　传代比例首次传代建议1：2传代

　　1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶

　　传代方法

　　a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

　　c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

　　将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　注意事项

　　1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

　　2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

　　1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存；

　　2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

　　到货须知

　　1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

　　2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第2,3天请拍照），记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

　　三、细胞冻存操作

　　冻存液配方无血清冻存液，液氮储存

　　细胞密度待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例

　　冻存方法a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

　　b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

　　注意事项冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案。

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