智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！

　　我们的工作主要包括：广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种；保存用于专利程序的各种可培养生物材料；质粒载体类保藏技术研究；微生物分离、培养技术研究；微生物鉴定和复核技术研究；保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。

　　种属：人源细胞系/肺、气管、支气管

　　到货周期：10-15个工作日

　　细胞介绍

　　该细胞来源于高加索白人男性，提取于病人在接受治疗前的骨髓转移。

　　细胞特性

　　1）来源：骨髓转移

　　2）形态：上皮细胞样

　　3）含量：>1x10e6个/mL

　　4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

　　细胞用途：仅供科研使用。

　　细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

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