小鼠神经元细胞NSC34

　　细胞数量：1*10^6

　　组织来源：小鼠，胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生

　　形态特征：杂交细胞系，胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生

　　生长方式：贴壁细胞与悬浮细胞同时存在

　　背景描述：NSC-34是一株杂交细胞系，由富含运动神经元的胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生。包含两种细胞群：能够进行细胞分裂的小型未分化细胞和较大的多核细胞。这些细胞表达运动神经元的许多特性，包括胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱合成、储存和释放以及神经丝三联体蛋白。

　　培养条件：DMEM高糖（含丙酮酸钠），10%FBS；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养

　　换液频率：2-3天

　　传代比例：1：4-1：5

　　冻存液配方：95%完全培养基，5%DMSO

　　安全性：BSL-1

　　供应限制：仅供科研

　　运输方式：常温运输（T25培养瓶）

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%FBS，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

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