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细胞铺板是细胞实验中最常见又必须掌握的一门技术，看似简单，然而却经常遇到如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象，结果就是只能整板扔掉，重新铺板，既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。历经多次失败后，你才会发现，原来细胞铺板是有规律可循的，今天我们就聊一聊：细胞铺板的3种手法。

　　首先，我们来看看细胞铺板不均匀的3种最常见情况：

　　1，中间多，周围少

　　2，中间少，四周多

　　3，呈现一坨一坨的状态

　　这么多种不均匀的情况，到底该怎么拯救呢？一起来看看细胞铺板的三种手法：

　　手法一：均匀单层

　　要铺成那种很均匀的单层细胞，手法如下：

　　1，细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基，放入孵箱中放置10-20min。

　　2，在滴入细胞时，细胞板子与通风橱有一定的角度，沿着板壁的孔边缘滴入。

　　3，滴入后，呈“8”字方法摇晃5-8次。

　　4，置于水平台上，放置10-20分钟

　　5，放入孵箱。

　　在细胞铺板时，每一种板子的孔面积有多大，培养的液体量以及加入细胞量如下：

　　手法二：中间少，周围多

　　其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀，比如，做免疫荧光时，我们会更喜欢铺中间少，周围稍多的板子，

　　因为这个样子可以同时检测到单个细胞的形态，另外又可以照一点低倍的用作于统计，所有的细胞都在一个环境中。

　　特别说明一下：这里的多也只是相对于多，细胞也是单层的。

　　要铺这样的细胞样子，那铺细胞时要注意手法了：

　　1，细胞板子不需要提前用培养基润洗，直接从边上滴入混有细胞的培养基。

　　2，放置30s-1min后，前后摇晃5-8次。

　　3，放在水平台上静置2-5min。

　　4，放入孵箱。

　　手法三：中间多，周围少

　　学一般在提取蛋白或者提取RNA的时候，可以这样铺板，因为有些细胞刮刀不好用，没有办法刮到周围的。想要铺中间多，周围少的板子，手法如下：

　　1，细胞板子不需要提前润洗，从中间滴入进去后。

　　2，把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。

　　3，水平台上静置2-5min。

　　4，放入孵箱。

　　总结一下：想要细胞铺板铺得好，背景知识很重要

　　其实在铺细胞的时候，你要准确的知道你所养的细胞的特性，比如：

　　1，细胞的名称，来源。

　　2，细胞的属性。

　　3，细胞分裂时间。

　　还有，最主要的是要搞清楚你的细胞的生长曲线，还要知道铺板后多久可以到达什么细胞密度。

　　如果你准确的掌握了你的细胞特性，那铺板是分分钟搞定的事情。

　　细胞铺板后，细胞状态不好怎么办？

　　如果出现这种情况，我们建议你从以下几个方面考虑一下原因：

　　1，用来铺板的细胞状态本身就不好。

　　2，用来铺板的细胞传代次数太多，有些老化。

　　3，胰酶消化时间过长。

　　4，中和的血清量及时间不够。

　　5，支原体污染。

　　细胞铺板是一个经验积累的过程，你的手法也需要积极的改进，不要生搬硬套，也不要一味追求绝对的铺均匀，在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性，出现问题积极解决即可。

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