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　　细胞生长状态受多种因素影响，在培养细胞时，我们知道温度不能过高也不能过低，有些细胞培养前还需要包被培养瓶，但实验过程中我们很容易忽略这些小因素，导致细胞负伤惨重。

　　这些小细节究竟如何影响的细胞状态？在培养时我们又该如何避免？本期细胞学堂普诺赛整理了影响细胞生长最常见的五类因素，助您完美避坑！

　　01、细胞生长附着物

　　贴壁细胞在正常情况下都会贴壁，但某些细胞本身贴壁不牢或贴壁性差，而包被附着物能够促进细胞的黏附，所以在培养一些特殊细胞时，需要对培养瓶/皿进行包被后使用。常用的基质有多聚赖氨酸（D型、L型）、明胶、胶原蛋白、细胞外基质混合物，培养时可根据需要自行选择。

　　小贴士

　　细胞贴壁差时可使用基质包被培养瓶/皿。

　　02、细胞之间的接触程度

　　正常细胞（二倍体）存在贴壁接触抑制，长满后细胞生长停止，而肿瘤细胞等非正常细胞，接触抑制作用较弱，可生长至较高的细胞密度，但某些细胞一旦长过，其损伤难以逆转，所以培养细胞时不建议细胞密度太高。

　　小贴士

　　无论什么细胞，都不能长满再传代，一般细胞汇合度达到70-80%即可传代。

　　03、培养基PH值

　　大多数细胞系在PH7.4左右时生长最好，而常规培养基的指示剂为酚红，所以多数情况下，我们所见的培养基都呈红色，但不同培养基的颜色会有差异，例如DMEM比1640颜色深一点。在培养细胞时，也可以根据培养基的颜色判断细胞状态，如随着细胞生长，pH值会变成黄色。

　　小贴士

　　培养时时刻关注培养基颜色变化，发现异常及时处理。

　　图1.培养基PH值对应颜色

　　04、气相成分

　　大部分培养基适合于95%空气5%CO2，但有部分培养基例外，如L15培养基适合于100%空气，CO2会导致培养液PH降低（培养液变黄），严重影响细胞生长；若需要用L15培养基培养细胞，但没有100%空气培养箱时，可以拧紧瓶盖或换培养基（效果可能更好）培养。适用于CO2环境的培养基需保持培养瓶透气。

　　小贴士

　　培养细胞时注意参照说明书选择培养基，并注意培养坏境。

　　05、培养温度

　　对于大部分人源细胞和温血动物细胞系来讲，比较适宜的培养温度是37℃，因为这个温度接近体温，但为了安全可以再稍低一些，高于体温的温度要比低于体温的温度更易产生问题。对于鸟类细胞，由于其体温较高，所以培养温度可以设置为38.5℃左右。

　　小贴士

　　培养细胞时保持温度稳定，不要长时间敞开培养箱的门，并且不要将培养器皿大量重叠堆放在培养箱中，避免空气不循环。

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